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    凍存的原代細胞該如何開(kāi)始培養?

    點(diǎn)擊次數:1061  更新時(shí)間:2019-12-27
    原代細胞是剛從體內取出的組織中獲得的細胞,要求不嚴格的話(huà),十代以?xún)榷妓阍毎?。因為離體不久,所以其對外界的刺激的反應更接近體內的實(shí)際情況,這也是為什么藥篩要用原代細胞,或者起碼要有原代細胞的驗證。
     
    凍存的原代細胞該如何開(kāi)始培養?
    (1) 將一管細胞從液氮罐中取出,注意保護手和眼睛。
    (2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中,輕輕握住并旋轉,直到管內物體*融化。
    (3) 將凍存管立即從水浴中拿出,擦干,轉入無(wú)菌環(huán)境。
    (4) 用70%的酒精沖洗凍存管,然后擦去多余酒精。
    (5) 打開(kāi)蓋子,注意手指不要碰到里面的螺紋(注意,由于凍存管有負壓,開(kāi)蓋時(shí)可能會(huì )有少量溢出,這是正?,F象)。
    (6) 用多聚賴(lài)氨酸包被培養瓶。多數細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個(gè)細胞。
    (7) 蓋好培養瓶的蓋子,輕輕搖晃培養瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開(kāi)蓋子。
    (8) 將培養瓶放入培養箱中。
    (9) 放入培養箱后第6-16小時(shí)更換一次培養基,以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。 
     
    原代細胞的組織塊培養法:
    1)組織塊接種后的前3天,在觀(guān)察和移動(dòng)的過(guò)程中,注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動(dòng)和振動(dòng),否則組織塊不易附著(zhù)于瓶壁上或附著(zhù)后也會(huì )脫落飄起。
     
    2)加入的培養液不宜過(guò)多,避免浸泡的組織塊受輕微的波動(dòng)而脫落下來(lái)。
     
    3)當細胞向外遷徙出來(lái)后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞,它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會(huì )影響原代細胞的生長(cháng)。
     
    4)為促進(jìn)組織塊盡快粘貼在培養瓶皿上,可以在種植前先將膠原薄層涂在培養瓶底壁上。
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